細胞傳代培養是指當原代培養的細胞增殖至接觸抑制、營養耗竭時，將其分散后按比例轉移至新培養容器中，繼續維持生長擴增的技術，也叫繼代培養，是細胞培養中基礎的常規操作之一。
分類：
貼壁細胞傳代：采用酶消化法，常用0.25%胰蛋白酶-EDTA混合液處理，使細胞從培養瓶壁脫落。
懸浮細胞傳代：可直接采用離心法，1000rpm離心3-5分鐘后重懸分裝，也可直接吸棄部分上清后吹打傳代。
半懸浮細胞傳代：貼壁不牢固，可直接吹打使細胞脫落完成傳代。
細胞傳代培養操作步驟如下：
（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態和生長密度，當細胞生長密度達到80%~90%時，即可進行傳代。
（2）吸掉或倒掉培養瓶內的培養液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。
（3）根據培養瓶大小向瓶內加入適量含EDTA的，一般應覆蓋整個培養瓶底。
（4）把培養瓶放入37℃ CO2培養箱進行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發現有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時，再輕輕拍打培養瓶使剩余細胞脫落，然后立即加入2倍量的培養液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。
（5）吸出所有細胞懸液至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。
（6）棄上清，加入適量培養液重懸細胞，輕輕吹打混勻，使細胞均勻分散。
（7）用吸頭吸取適量細胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養瓶中，補足培養液，搖勻，放置于37℃ CO2培養箱中進行培養。
（8）根據細胞生長狀態確定換液或傳代時間，甚至進行細胞凍存。
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