結合此前關于大鼠肺泡上皮細胞培養、表型維持的相關背景，大鼠Ⅰ型肺泡上皮細胞（AEC-Ⅰ）本身體外極難長期存活，幾乎無法穩定傳代，僅能通過以下特殊操作實現有限傳代：
?前置準備?
選用體外培養3天內、表型穩定的AEC-Ⅰ，使用含2%低血清+10ng/mL EGF的DMEM/F12培養基，提前預熱所有試劑至37℃。
?消化操作?
棄去舊培養基，用無鈣鎂PBS輕洗細胞2次，加入0.05%低濃度胰酶，37℃消化1分鐘，顯微鏡下觀察細胞剛變圓就立即用培養基終止消化。
?接種培養?
1000RPM離心5分鐘收集細胞，以不低于2×10?個/cm2的高密度接種，置于37℃、5%CO?培養箱中培養，24小時后換液。
?關鍵注意事項?
該細胞傳代后僅能維持3-5天的AEC-Ⅰ表型，無法進行二次傳代，需在傳代后盡快完成實驗，避免細胞發生去分化或凋亡。
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